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蛋白质组学


iTRAQ/TMT 标记定量蛋白质组学

 技术介绍


用于相对绝对定量的稳定同位素标签（iTRAQ，isobaric Tag for Relative Absolute Quantitation）和串联质量标签（TMT， Tandem Mass Tags）分别是由AB SCIEX和赛默飞世尔开发的两种类似的定量蛋白质组学技术，。这两种技术最显著的优点是可以标记多达10个不同的样品，并通过LC-MS/MS分析比较相对蛋白质组学变化。iTRAQ/TMT通常由报告基团、平衡基团和反应基团三部分组成，，每组的标记试剂的报告基团不同，总分子量相等。各组多肽样品通过与反应基团化学反应，从而得到标记，再将各组样品等量混合进行后续的蛋白定性定量分析。由于每组标记试剂的总分子量相等，在一级质谱图中，不同的iTRAQ标签标记肽具有相同的质量数，因此出现在相同的MS峰中。然而，当在MS / MS二级碎裂时，报告基团解离产生离子信号，从而提供有关样品中肽相对量的定量信息。由于iTRAQ/TMT化学标记效率高（>98%),相对定量准确性好，费用较低，一次实验可以设计6-16组不同的实验样品蛋白质组比较，因此是发现蛋白质组学研究的首选。

iTRAQ/TMT实验流程如下：

图片.png

8 plex iTRAQ试剂如下：

iTRAQ重制图.png

分析仪器
Q-Exactive plus nano-ESI LCMS/MS                                                                                     Thermo Fusion nano-ESI LCMS/MS

 图片.png

应用范围
6-16例样品数量的定量蛋白质组学比较。各种细胞，亚细胞器，组织、体液（血液，尿液，唾液）发现蛋白质组研究。
样品要求

1）.有蛋白组或者转录组测序后注释的蛋白质组数据库（只需提供拉丁物种名，公司下载）

2）.样品要求信息如下表

样品类型

样品要求（每组）

  蛋白质溶液

    浓度>0.5ug/ul，蛋白总量>100ug

  动物细胞样品

    细胞量>106

  细菌等微生物

    细菌总重量>10mg

  植物组织样品

    新鲜组织>100mg

  动物组织样品

    新鲜组织>5mg

  血清

    200ul

  唾液

    300ul

  尿液

    1ml

1. 告知溶液内成分，如SDS、NP40、Triton、缓冲盐等，SDS含量<1%。

2. 干冰运输；

交付内容
1）.质谱原始文件；2）.质量峰图（每个样品2张）；3).实验方法与结果报告
参考文献



1. Wu J, Zhang Y, Wu Q, et al. Integrative analyses of myocardial lipidome and proteome implicate mitochondrial dysfunction in lethal ventricular tachyarrhythmia (LVTA) induced by acute myocardial ischemia (AMI). J Proteomics. 2019;197:14-22（客户文章）

2. Liu Y, Zhang M, Liu Z, et al. A strategy can be used to analyze intracellular interaction proteomics of cell-surface receptors. Amino Acids. 2023;55(2)（客户文章）

3）.Pan, Yihui et al. “EHBP1L1 Drives Immune Evasion in Renal Cell Carcinoma through Binding and Stabilizing JAK1.” Advanced science (Weinheim, Baden-Wurttemberg, Germany), e2206792. 12 Feb. 2023.（客户文章）