毛细管等电聚焦 (clEF)

毛细管等电聚焦（Capillary Isoelectric Focusing, CIEF）是一种基于蛋白质等两性分子等电点（pI）差异的高分辨率分离技术。其核心原理是通过电场驱动两性电解质在毛细管内形成连续pH梯度，使样品分子迁移至与其pI对应的pH区域（净电荷为零）并聚焦成窄区带。实验时，将样品与两性电解质混合注入毛细管，施加高电压后，蛋白质根据所处局部pH与其自身pI的关系定向移动：当环境pH低于pI时带正电向负极迁移，反之带负电向正极迁移，直至到达pI位置停止。聚焦完成后，通过压力或电迁移推动区带经过检测窗口（如紫外吸收），生成电泳图谱以分析各组分pI。该技术无需标记，可区分pI差异仅0.01的蛋白质，且仅需纳升级样品，兼具高灵敏度和自动化优势，广泛应用于单抗电荷异质性分析、生物标志物筛选、疫苗质量控制及翻译后修饰研究等领域脱酰胺作用、天冬氨酸、甘氨酸改变形成琥珀酰亚胺、C末端赖氨酸异质性、谷氨酸和谷氨酰胺转换和二硫键的氧化修饰、唾液酸化糖基化程度都会引起蛋白等电点变化。